实验材料：眼科剪刀1把 眼科镊子2把 1×PBS约200ml M199培养液 离心机 5ml小皿 10ml大皿
实验步骤：
1.在超净台内用10ml的离心管分装5ml的1×PBS（已高压灭菌）。
2.手术台上取患者发生动脉粥样硬化改变的病变动脉，分放入准备好的PBS中，拿回实验室在超净台中，无菌条件下剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其剪成1×1mm大小组织块。
3.消化法：PBS清洗组织块后并将其转移入10ml的离心管，加入0.125％胰酶消化37℃30分钟，室温吹打100分钟或者振荡器振荡100分钟，待组织块变小且消化液变粘时，收集消化液配平以1500转/分钟离心10分钟后，收集细胞种植于预先加入M199培养液的5ml小皿中放入37度5％CO2的培养箱中。
4.贴块法：PBS清洗组织块后移入已准备好的10ml大皿中，块间距为0.5cm，放入37度5％CO2的培养箱中，3小时后，待组织块贴壁后，再加入2ml培养液后放回37度5％CO2的培养箱中。 注意：最后加入2ml培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下，勿使组织块吹下。
5.随后每3天予以半量换液。
6.一周后可见组织块周围有细胞爬出，大约3周后80%融合。因本人系非细胞生物学专业人员，本细胞培养时间又很短，多次进行细胞传代未成功，还望有经验的专家指点。 |
