实验材料：手术剪1把、手术钳2把、眼科剪刀2把 、眼科镊子1把 、大头针4个、手术刀片、无菌1×PBS约500ml 20%FBS的DMEM、5ml小皿3个、 10ml大皿1个、杀鼠板1块。（以上均为无菌物品）

实验步骤

1、 150-200gSD-大鼠，短头，浸入75%的酒精中15min

2、 置入超净台中，将大鼠固定于杀鼠板上，在无菌条件下打开腹腔，分离出胸主、腹主，摘出。

3、 PBS清洗3遍，剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其移入1ml的培基中、剪成1×1mm大小组织块。

4、再将PBS清洗组织块，移入25ml的培养瓶中，用尖嘴弯管均匀贴好组织块，放入37度5％CO2的培养箱倒置培养6小时后，待组织块贴壁后，再加入2.5ml培养液后放回37度5％CO2的培养箱中。 注意：最后加入2ml培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下，勿使组织块吹下。

5、 随后每3天予以全量换液。

6、 3-5天后可见组织块周围有细胞爬出，大约2周后80％融合。

本人曾做过3个月的SD大鼠VSMC的原代培养，基本上的所有的障碍都遇到过，现在已做的相当成功，并乐意与大家分享经验！