返回首页 | 关于我们 | 设为主页 | 加入收藏
来福赛思--首页 公司简介 产品展示 新闻动态 技术专栏 在线留言 人才招聘 联系我们  
北京来福赛思科技有限公司 北京来福赛思科技有限公司
 
诊断试剂原辅料
疫苗生产原辅料
基因制药原辅料
细胞培养原辅料
微生物检测产品
常用仪器及耗材
WHO国际标准物质
 
站内信息搜索
关键字:
栏目导航:
 
技术专栏
 
牛血清白蛋白的提取与鉴定
发布日期:2013-01-09      浏览:2793

一、 实验目的

掌握牛血清白蛋白的提取与鉴定方法

二、 实验原理

牛血清白蛋白是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量68kD。等电点4.8。应用相同浓度硫酸铵盐析法将血清中白蛋白与其它球蛋白分离,最后用透析法除盐,即可提取白蛋白。再利用电泳过程中带电粒子的移动 速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠度等有关,对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。


三、 实验步骤

(一)盐析

取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS(磷酸盐缓冲生理盐水)稀释血清,摇匀后,逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL,边加边摇,充分混匀,然后静止放置10分钟,再离心(4000r/min)10min,将上清液倾入试管中。

(二)透析

取玻璃纸一张,折成袋形,将离心后的上清液倒入袋内,用线扎紧上口(注意要留有空隙),用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内,使透析袋下半部侵入水中,对蛋白液进行透析,常用玻璃棒搅拌袋外(烧杯中)液体,以缩短透析时间。更换蒸馏水多次,用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+,观察颜色变化,直至袋内盐分透析完毕。将袋内液体倾入试管,即得牛血清白蛋白溶液。

(三)电泳

(1)点样:取一张膜条,将薄膜无光泽面向下,放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透,取出,用干净滤纸吸去多余的缓冲液,以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处作点样线,将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。

(2)电泳:将点样后的膜条置于电泳槽架上,放置时膜条无光泽面向下,点样端置于阴极,待平衡5min后,打开电源,调节电泳仪的电压为160伏,通电60min,关闭电源后用镊子将膜条取出。

(3)染色:将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中,染2分钟取出,立即浸于漂洗液中,分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5min,直至背景漂洗干净为止,用滤纸吸干薄膜。

(4)鉴定:比较样品与待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果,看位置是否一致。

四、 实验仪器和试剂

仪器:离心管、离心机、试管、玻璃纸、烧杯、比色磁盘、滴管、玻璃棒、电泳仪、醋酸纤维素薄膜、分光光度计。

试剂:牛血清待测液、牛血清样品、PBS(磷酸盐缓冲生理盐水,用0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)配制的0.9%NaCl溶液)、pH7.2饱和硫酸铵溶液、纳氏试剂、巴比妥缓冲液、氨基黑10B染色液、漂洗液、0.4N氢氧化钠溶液。

五、 预测结果

位置一致,实验成功。若在待测液的电泳结果中出现其他球蛋白的黑带区域,则说明提取不够纯。

 
首 页     |     公司简介     |     产品展示     |     特价促销    |     新闻动态    |     技术专栏    |     在线留言     |     人才招聘     |     联系我们     |     企业邮箱
联系经理
Merck ThermoFisher Bovogen Fitzgerald biospacific bbisolutions meridianlifescience bioventix Diasource EastCoastBio mybiosource calbioreagents ProSpec Nittobo/IIC-MBC Icl medix leebio 德国progen Genwaybio Norwegian Antibodies lumigen PolyMicrospheres magsphere biorbyt southernbiotech Abcam Rabios Abbexa Sdix Capricorn Apollo OXOID acros SERVA Seramun cygnustechnologies generalchemical ChemTrade Pharmacosmos Corning Axygen nibsc NIST IRMM标准品 edqm JCCRM
联系经理
©2012 北京来福赛思科技有限公司 Tel:010 8174 3370 Fax:010 8174 3370 MP:136 4103 4192 Mail:info@bj-life-science.com 京ICP备15009805号-1